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PRACTICA N° 4
CULTIVOS MICROBIANOS
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANOFACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICASARPASI ORDOÑO Dennys Alfredodealfred_111@hotmail.com
RESUMEN:
Los medios de cultivo constituyen la herramienta fundamental en los laboratorios de
Microbiología, por lo que realizar pruebas de control de calidad a los medios preparados
es vital, con el fin de comprobar si estos cumplen con sus especificaciones y si la
metodología empleada en su preparación es satisfactoria. Teniendo así como objetivos:
Establecer los fundamentos teóricos para la preparación de medios de cultivo, Aprender la
clasificación y uso de los medios de cultivo y Preparar medios de cultivo y manejar
adecuadamente la autoclave (olla a presión). Metodología: Esterilización y preparación de
medio de cultivo (técnicas por disolución, puntos y exposición de placa). Los resultados
obtenidos aun no son definidos, ya que no se observo si realmente crecieron los
microorganismos. Pero si se llego a la conclusión de que existen diferentes maneras de
cultivar o sembrar microorganismos, de acuerdo al uso y necesidad de los medios de
cultivo, Para ello tenemos que saber los fundamentos teóricos para la preparación de
medios de cultivo.
Palabras Clave.- Cultivo microbiano, Disolución, Exposición, Plaqueado.
ABSTRACT
The culture media are the fundamental tool in microbiology labs , so testing quality control
is vital media prepared in order to check whether they meet your specifications and
whether the methodology used in their preparation is satisfactory. Taking and objectives :
To establish the theoretical foundations for the preparation of culture media , Learning
classification and use of culture media and culture media Prepare and properly handle the
autoclave ( pressure cooker ) . Methodology: Sterilization and preparation of the culture
medium (by dissolution techniques, and plate exposure points). The results are not yet
defined, since it was not observed if actually grew microorganisms. But if I conclude that
there are different ways to cultivate or sow microorganisms, according to the use and need
for culture media, for this we need to know the theoretical basis for the preparation of
culture media.
Keywords.- Microbial culture, Dissolution, Exhibition, plating.
I. INTRODUCCION
En biología, y específicamente en microbiología, un cultivo es un método para la
multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se
prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado
como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos
que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria ( Restrepo et al, 2003)
A los cultivos microbianos originalmente se les designaba como prebióticos, sin embargo,
en 1989 la Administración de Fármacos y Alimentos (FDA de Estados Unidos de
Norteamérica) estableció que no era adecuado el nombre de probiótico; por lo tanto, se
modificó la nomenclatura a “cultivos microbianos proporcionados directamente” o “cultivos
microbianos” (González 1995).
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante. [1]
Hubert (1987), Jones y Thomas (1987) mencionan que los cultivos de levadura presentan
varias características importantes: 1) No son patógenos, ni tóxicos, 2) No se absorben en
el tracto digestivo, 3) No dejan residuos en los tejidos animales, 4) Se utilizan en
pequeñas cantidades, 5) Proliferan in vivo e in vitro, 6) Promueven el crecimiento de
bacterias celulolíticas, 7) Son estables a temperaturas elevadas y 8) No causan mutación.
La elaboración de medios de cultivo requiere proporcionar los elementos antes citados en
una forma asimilable. Así, por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono orgánico
para los heterótrofos y como CO2 para los autótrofos, el N en forma de NH4, de NO3 o de
NO2 o en forma de aminoácidos a los que se pueda tomar su grupo amino. [2]
II. ANTECEDENTES:
Estos antecedentes, no son exactos pero tiene similitud con nuestra practica ya q para
estas investigaciones se utilizaron cultivos microbianos.
Las poblaciones de bacterias totales, bacterias fijadoras de N atmosférico de vida
libre, bacterias asimiladoras de N, bacterias degradadoras de petróleo, hongos totales
y hongos degradadores de petróleo se encontraron en sistemas rizosféricos de los
pastos alemán y cabezón, establecidos en Gleysoles contaminados con derrame
reciente, en Gleysol con derrame crónico y muy contaminado y en Gleysol no
contaminado con petróleo.
Las poblaciones de bacterias totales, bacterias fijadoras de N atmosférico de vida
libre, bacterias asimiladoras de N, bacterias degradadoras de petróleo, hongos totales
y hongos degradadores de petróleo se encontraron en sistemas rizosféricos de los
pastos alemán y cabezón, establecidos en Gleysoles contaminados con derrame
reciente, en Gleysol con derrame crónico y muy contaminado y en Gleysol no
contaminado con petróleo. (Rivera M. et al, 2002).
Se obtuvo mejores resultados por el método del papel filtro y aceite esencial no
encapsulado, con un halo de inhibición de 1.7 cm, no se evidenció diferencias
respecto al tipo de cultivo (levadura pura o mohos y levaduras presentes en tomate).
Respecto al empleo del aceite esencial encapsulado se puede decir que no tuvo un
efecto significativo ya que el medio de cultivo se encontraba con una humedad muy
elevada, humedeciendo excesivamente las cápsulas de la β-ciclo dextrina diluyendo la
liberación y acción del aceite esencial. (Chamorro A. et al, 2010).
Se observa también un efecto de la variedad de papa sobre las poblaciones de estos
microorganismos en la rizósfera, lo que confirma la influencia de los exudados de la
planta sobre las poblaciones rizosféricas. Del total de 17 muestras procesadas se
obtuvieron 63 aislamientos de Bacillus spp., 29 (46%) de Huancavelica y 34 (54%) de
Puno; 37 aislamientos de Actinomicetos, 32 (87%) de Huancavelica y 5 (13%) de
Puno y 50 aislamientos de Azotobacter spp., 37 (74%) de Huancavelica y 13 (26%) de
Puno, observándose para estos dos últimos casos una mayor diversidad en suelos de
pH ácido. (Calvo P. et al, 2008).
III. OBJETIVOS:
Establecer los fundamentos teóricos para la preparación de medios de cultivo.
Aprender la clasificación y uso de los medios de cultivo.
Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave (olla a presión)
IV. MATERIAL Y METODOS:
4.1.- Materiales:
- mecheros Bunsen
- Aza de siembra
- 5 placas petry
- 1 matraz de 500 mL
- 1 balanza
- 1 espátula
- 1 probeta de 250 mL
- 2 tubos de ensayo
- Cinta Masking tape
- Agar Saboraud
- Plumón indeleble
- Trapo
- Muestras de hongos
- Muestras de tierra.
- Agua destilada
Figura 1
4.2.- Métodos:
4.2.1.- ESTERILIZADO:
Se realiza el mismo proceso, utilizado en la anterior practica (preparación de medios y
esterilización de materiales)
1.- Lavar material con detergente líquido, enjuagar con abundante agua de la llave y al
final con agua destilada.
2.- Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al aire.
3. En las pipetas poner un filtro de algodón en la boquilla y envolver con papel Kraft.
4.- Envolver las cajas de Petri y tubos de ensayo.
5.- Introducir los hisopos en un tubo y tapar con algodón.
6.- Identificar con nombre y marcar el volumen en el papel de las pipetas.
7.- Listo para ser esterilizado.
4.2.2.-PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO:
1.- Leer cuidadosamente el membrete del medio de cultivo (leer las indicaciones para el
preparado)
2.- Calcular la cantidad necesaria para preparar 120 ml de Agar Saboraud
Exactamente seria:
65g AS ---------------------- 1L
X ---------------------- 120 ml
X= 7.8 g AS
Figura 2.
3.- Disolver el medio en 100mL de agua destilada y una vez disuelto completar el volumen
a 120mL. (Dejar reposar 1 a 2 minutos)
4.- Tapar el matraz y calentar hasta disolver totalmente durante 1 a 2 minutos.
5.- Alistar tubos de ensayo y vaciar equitativamente la solución, luego taparlo con algodón
y etiquetarlos.
Figura 3. Procedemos a esterilizar todo.
4.2.3.- EMPEZAMOS A PLAQUEAR.
A) Técnicas de disoluciones:
- Para ello se preparo una muestra, aparte de
tierra (1 g de tierra y 9ml de agua destilada)
Figura 4.
- Luego se empezó a colocar en las placas.
- Para ellos se saco la muestra ya preparada con una pipeta, Seguidamente se
coloco la muestra en el centro de la placa y se cubrió con el agar preparado.
Figura 5 y 6.
B) Técnica por Puntos ( se realiza en una muestra ya plaqueada)
1.- Esterilizar los bordes.
2.- Alistar las placas.
3.- Esterilizar la boca del matraz
4.- Vaciar a una placa
5.- Hacer movimientos suaves
Después de plaquear, esperar a que se gelifique el Agar. Luego cargar con hongos y
empezar a colocar en distintos lugares ( en cada punto, como se muestra en la figura 8)
Figura 7 y 8.
C) Exposición de Placa (Agar Gelificado)
- Después que quedo gelificado , Destapar y
exponer la placa al medio ambiente (durante
30 minutos)
Figura 9
- Luego de todo el procedimiento. Marcar con
lapicero indeleble y Llevar a la incubadora
Figura 10.
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Bueno aun no se ha revisado los resultados, Pero de acuerdo a los pasos que hicimos,
esta claro que deberían quedarnos de este modo
Figura 11. Sembrados por disoluciones. Figura 12. Sembrado por Puntos
Tras la incubación, el número de colonias resultantes. se corresponde con el número de
células vivas que inicialmente había en la dilución de la muestra sembrada. ¡Podemos
contar células vivas! (Balsalobre J.)
VI. CONCLUSIONES.-
Se llego a la conclusión de que existen diferentes maneras de cultivar o sembrar
microorganismos, de acuerdo al uso y necesidad de los medios de cultivo, Para
ello tenemos que saber los fundamentos teóricos para la preparación de medios
de cultivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Restrepo A.,Robledo J., Leiderman E., Restrepo M., Botero D. y Bedoya V. (2003)
Enfermedades Infecciosas. 6ta Edición. Ediciones Quebecor Word, Bogota S.A.
Colombia Disponible en: http://books.google.com.pe/books?id=67FIJx2qf
U8C&pg=PA14&redir_ esc=y#v=onepage&q&f=false
Avendaño, B.H., González, M.S.S., García-Bojalil, C., Mendoza, M.G.D., Bárcenas, G.R.
1995 Efecto del nivel de rastrojo de maíz y de un cultivo de levadura
(Saccharomyces cerevisiae; Yea-Sacc1026) en el valor nutritivo de dietas para bo-
rregos en crecimiento. Memorias VII Congreso Nacional AMENA, Veracruz.
Jones, C. And Thomas, C.
1987 Maintenance of strain specificity and bile tolerance when producing. In: T.P.
Lyons Ed. Biotechnology in the Feed Industry. Alltech’s. Biotechnology center.
Nicholasville, KY. USA.
Hubert, J.T.
1987 Fungal additives for lactating cows. Department of animal Sci. University of
Arizona, USA.
Rivera M., Rodríguez R., Ferrera R., Fernández L., Volke V. (2002). Adaptación y
selección de microorganismos autóctonos en medios de cultivos enriquecidos con
petróleo crudo. Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57320407
Chamorro A., Quispe S., Quito V., Moisés R., Beltrán Susy K. (2010). Evaluación de la
Capacidad Antimicrobiana del Aceite Esencial de Orégano (Origanum
vulgare) Micro encapsuladas en β-ciclo dextrina Aplicados en Cultivos Microbianos
Disponible en:
http://papiros.upeu.edu.pe/bitstream/handle/123456789/217/RICTAV1N102.pdf?
sequence=1
Calvo P., Reymundo L. y Zúñiga D. (2008). Estudio de las poblaciones microbianas de la
rizósfera del cultivo de papa (solanum tuberosum) en zonas alto andinas.
Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/ecol/v7n1-2/a17v7n1-2.pdf
Balsalobre J. preparación y análisis de cultivos de microorganismos con las limitaciones
de un laboratorio de secundaria Disponible en:
http://www.murciencia.com/upload/comunicaciones/34_preparacion_analaisis_culti
vos.pdf
[1] Los Cultivos en Microbiología. Pagina web:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm Fecha de revisión:
16/11/2013.
Buscador: www.google.com.pe
[2] Importancia de los medios de cultivo. Pagina web:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Importancia-De-Los-Medios-De-
Cultivo/442561.html Fecha de revisión: 16/11/2013
Buscador: www.google.com.pe