Bioaktív komponensek kimutatása növényi

mintákból

Dr. Remenyik Judit PhD(Kertészettudományi és Növényi

biotechnológia TanszékBiokémiai és molekuláris diagnosztikai

laboratórium)

Mérés menete

Mintavétel

Minta tárolás

Minta előkészítés

Mérés

Mintavétel

Adott fajra, fajtára jellemző legyen

Adott termőhelyre jellemző legyen

1. Nagy számú/ nagy tömegű egyed gyűjtése

2. Homogenizálás

3. A minta tárolása

4. A minta szállítása

A minta tárolása

Minden esetben a mérendő komponenstől függ!

1. +8 °C

2. -20°C

3. Liophilizálás

4. - 70 °C

A minta előkészítése

Homogenizálás

Feltárás

Kioldás

Szűrés , tisztítás

Bioaktív komponensek

Cukor tartalom- egyszerű cukrok (glükóz, fruktóz szacharóz )

Savtartalom (almasav, citromsav)

Fehérje tartalom

Rost tartalom (oldhatatlan, oldható)

Szárazanyag

Nitrát tartalom

Bioaktív komponensek

Antioxidáns sűrűség meghatározás

Vízoldékony- és zsíroldékony antioxidánsok

1. Vízoldékony antioxidánsok:

a. C-vitamin

b. Antioxidáns fehérjék (enzimek)

c. Vízoldékony színanyagok (antocianinok, flavonoidok)

d. B-vitaminok

e. Galluszsav

Bioaktív komponensek

2. Zsíroldékony antioxidánsok

a. Karotinoidok

b. Tokoferolok

c. Szabad zsírsavak

d. Izoprén származékok

e. Klorofollok

f. Polifenolok

g. A-vitamin

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

HO

HOOH

ORO

OR

ORO

O

C

COO

OHHO

HO

OC

ORO

OR

ORO

HOOH

OH (Gs)

RO

OHO

OHOH

HO

HOOH

O OC

C

O

OR

OR

ROO

OHHO

HO OHHO

HO

OH

O

OH

(katechin egység)n

OH

OH

H (OH)

O

HO

OH

(katechin egység)n

gallotanninok ellagitanninok

komplex tanninok kondenzált tanninok

Laboratoriumunkban vizsgált komponensek

O

* *

CH3

*

CH3

CH3

CH3CH3

R1

R3

HO

R2

α-tokoferol: R1,R2,R3=CH3ß-tokoferol: R1,R3=CH3; R2=Hγ-tokoferol: R2,R3=CH3; R1=Hδ-tokoferol:R3=CH3; R1,R2=H

Antioxidáns kapacitás mérése kemiluminométerrel

A mérés elve

1.A fotoérzékeny vegyületet hν energiával besugározzuk.

S+ hv→ S.+ + O2.-

A O2.- reagálnak a minta antioxidáns anyagaival.

2.A detektor vegyület lép ezután reakcióba a maradék O2.- .

O2.- + D → hv

3. A kisugárzott energiát méri a detektor.

Minták adatanalízise (ACW)

Minták adatanalízise (ACL)

Spektrofotometria

A fényintenzitás változását mérjük. Az UV-VIS tartományban az anyagok szelektíven adszorbeálják a fényt.A= ε*c*l A mérést minden estben az adszorpciós maximumon mérjük.Hibalehetőségek: Fényszóródás, oldószerpárolgásA ε nem helyes meghatározása .

Mérés 1.C-vitamin tartalom meghatározása

3.4. A C-vitamin (L-aszkorbinsav)

A mérés alapja

Erősen redukáló hatásúFe3+ → Fe2+

Fe2+ színes komplexet képeznek az α,α, dipiridil reagenssel

Fotometriás meghatározás1. Látszólagos C-vitamin tartalom2. Reduktonok3. Valódi C-vitamin tartalom

NAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIANAGYHATÉKONYSÁGÚ FOLYADÉKKROMATOGRÁFIAMŰSZERMŰSZER oszlop:oszlop:(kolonna)(kolonna)

felépítésefelépítése: : mintaminta

detektordetektor

szűrőszűrőelőelőkolonnakolonna: :

főfőkolonnakolonna

töltet: töltet: szilikagél (módosított),szilikagél (módosított),adszorbens, ioncserélő, gél,… adszorbens, ioncserélő, gél,…

hőfok: hőfok: szobahőmérséklet (!) szobahőmérséklet (!) 25 25 °°CC

mozgófázismozgófázis::

oldószerek, oldószer-keverékekoldószerek, oldószer-keverékek folyadékfolyadék

HPLC-készülék felépítése:HPLC-készülék felépítése:

pumpa:pumpa:

mintabevitmintabevitel:el:

detektor:detektor:

nagy nyomás biztosításáhoznagy nyomás biztosításához „„pulzálás-mentes” pulzálás-mentes” (több pumpa)(több pumpa)

fecskendőfecskendő szelepes megoldásszelepes megoldás

UV spektrofotometriás,UV spektrofotometriás,fluoreszcencia, fluoreszcencia, vezetőképességi, vezetőképességi, tömegspektrometriás,..tömegspektrometriás,..

UV-detektorUV-detektor

3. mintaadagoló3. mintaadagoló(minta)(minta) 4. oszlop 5. detektor1. eluens

(mozgófázis)2.2.

pumpapumpa6.

rekorder

I.I. oszlopkromatográfia:oszlopkromatográfia: 1. klasszikus, 2. GC, 1. klasszikus, 2. GC, 3. HPLC3. HPLC, 4. ionkr., 4. ionkr.II. rétegkromatográfia : II. rétegkromatográfia : 1. papírkr. 2. vékonyrétegkr. 1. papírkr. 2. vékonyrétegkr.

A kromatogram értékelése