Post on 08-Nov-2018
Análise Molecular de OGMsAnálise Molecular de OGMs
Identificação Molecular
Análise de DNA- PCR- Southern Blot - Real Time PCR- Arranjos
Análise de ProteínaBaseadas em imunologia
- ELISA- Western blot- Proteoma
Reação em Cadeia da Polimerase
Polymerase chain reaction - PCR
Técnica usada para amplificar uma região específica de DNA em visando produzir quantidade de DNA
suficiente para ser testado adequadamente
Reação de PCR
Como funciona??
Vantagens:- Rapidez- Sensibilidade- Custo
Desvantagens:- Falsos resultados
EXTRAÇÃO DE DNA
Qualidade do DNA
PCR
Termociclador
Eletroforese
Cubas horizontais
Visualização em UV
Positivo/Negativo
Presença ou ausência de banda em gel de agarose
Amplificação de genes via PCR
4. Hibridização da membrana com a sonda específica
Retirada da membrana com o DNA
Hibridização da membrana com sonda radioativa
Solução de transferência
Esponja
Gel
Membrana de Nylon Papel para Absorção
3. Transferência do DNA para a membrana de nylon (Blotting)
2. Eletroforese DNA em Gelde Agarose
5. Revelação do autoradiograma
Retirada das hibridizações
não específicas
1. Digestão do DNA com enzimas de restrição
Southern Blot
Cr-
cont
23,130 bp9,416 bp
6,557 bp
4,361 bp
2,322 bp2,027 bp
Cr-
P5-0
1
Cr-
P5-0
2
Cr-
P5-0
3
Cr-
P5-1
4
Ct-P
5-20
Plas
m.1
C
Plas
m. 3
C
Ct-P
5-07
Ct-P
5-08
Ct-P
5-16
Ct-c
ont
Análise da integração do DNA ao genoma por Southern Blot
Análise Molecular
Digestão com EcoRI e hibridação com sonda específica para
sarcotoxin IA
PCR
Southern blot
Análise do fenótipoSintoma aos 25 dias após inoculação (104 CFU/ml)
stx-5Controle
Western blot
Real Time PCR
Resultados após amplificação
Análise da Expressão de Genes
Arranjos de DNA
Aumento do número de genes
chips de DNAdiferentes seqüências para
detectar genes expressos ou introduzidos em plantas
Tecnologia de ArranjosTecnologia de Arranjos
ProteomaProteoma
Levantamento quantitativo de proteínas/peptídeos em uma amostra para identificar mudanças de interesse
Proteoma GenomaProteínas e peptídeos
Dinâmico
Células e tecido específicos
DNA
Estático
Orgão específico
Separação e preparo de amostraSeparação e preparo de amostra
Digestão - tripsina
Peptídeo
Separação